Uji Biokimia

 

Uji biokimia merupakan salah uji yang digunakan untuk menentukan spesies kuman yang tidak diketahui sebelumnya. Setiap kuman memiliki sifat biokimia yang berbeda sehingga tahapan uji biokimia ini sangat membantu proses identifikasi. Setelah sampel diinokulasikan pada media differensial atau selektif, kemudian koloni kuman diinokulasikan pada media uji biokimia. Ada 12 jenis uji yang sering digunakan dalam uji biokimia walaupun sebenarnya masih banyak lagi media yang dapat digunakan. Uji biokimia yang paling sering digunakan antara lain :

1. Uji Indol

Media yang dipakai adalah pepton 1%. Uji indol digunakan untuk mengetahui apakah kuman mempunyai enzim triptophanase sehingga kuman tersebut mampu mengoksidasi asam amino triptophan membentuk indol. Adanya indol dapat diketahui dengan penambahan reagen Ehrlich/Kovac’s yang berisi paradimetil amino bensaldehid.

Interpretasi Hasil : 

Negatif (-) : Tidak terbentuk lapisan cincin berwarna merah pada permukaan biakan,

                  artinya bakteri ini tidak membentuk indol dari triptophan sebagai sumber

                  karbon. 

Positif (+) : Terbentuk lapisan cincin berwarna merah pada permukaan biakan, artinya

                  bakteri ini membentuk indol dari triptophan sebagai sumber karbon.

 

Asam amino triptophan merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada protein, sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme.

2. Uji MR

Media yang digunakan adalah pepton glukosa phosphat. Uji ini digunakan untuk mengetahui adanya fermentasi asam campuran (metilen glikon).

Interpretasi Hasil :

Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambah

                  methyl red 1%

Positif (+) : Terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambahkan methyl

                  red 1%. Artinya bakteri menghasilkan asam campuran (metilen glikon) dari

                  proses fermentasi glukosa yang terkandung dalam media MR.

3. Uji VP

Media yang dipakai adalah pepton glukosa phosphat. Uji ini digunakan untuk mengetahui pembentukan asetil metil karbinol (asetoin) dari hasil fermentasi glukosa.

Interpretasi Hasil :

Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambahkan α

                  naphtol 5% dan KOH 40%.
Positif (+) : Terjadi perubahan warna media menjadi merah setelah ditambahkan α naphtol

                 5% dan KOH 40%, artinya hasil akhir fermentasi bakteri adalah asetil metil 

                 karbinol (asetoin).

4. Uji Citrat
Media yang dipakai adalah Simons citrat. Tujuan dari uji ini adalah untuk mengetahui apakah kuman menggunakan sitrat sebagai sumber karbon. Pada media Simons citrat berisi indikator BTB (Brom Tymol Blue). Apabila bakteri menggunakan sitrat sebagai sumber karbon maka media berubah menjadi basa dan berubah warna menjadi biru.

Interpretasi Hasil : 
Negatif (-) : Tidak terjadinya perubahan warna media dari hijau menjadi biru. Artinya

                  bakteri ini tidak mempunyai enzim sitrat permease yaitu enzim spesifik yang

                  membawa sitrat ke dalam sel. Sehingga kuman tidak menggunakan citrat

                  sebagai salah satu/satu-satunya sumber karbon 

Positif (+) : Terjadinya perubahan warna media dari hijau menjadi biru, artinya kuman

                 menggunakan citrat sebagai salah satu/satu-satunya sumber karbon.

 

5. Uji Motilitas

Media yang dipakai adalah media yang bersifat semi solid dengan kandungan agar-agar 0,2-0,4%. Tujuan dari uji ini adalah untuk mengetahui gerak kuman, bisa memakai media MO (Motilitas Ornitin) atau SIM (Sulfida Indol Motility). Pada media SIM selain untuk melihat motilitas bisa juga untuk test indol dan pembentukan H₂S.  

Interpretasi Hasil :
Negatif (-) : Terlihat adanya penyebaran yang berwarna putih seperti akar hanya pada

                  bekas tusukan inokulasi.
Positif (+) : Terlihat adanya penyebaran yang berwarna putih seperti akar disekitar

                 inokulasi. Hal ini menunjukan adanya pergerakan dari bakteri yang

                 diinokulasikan, yang berarti bahwa bakteri ini memiliki flagel.

6. Uji Urease
Tujuan dari uji ini adalah untuk mengetahui apakah kuman mempunyai enzim urease yang dapat menguraikan urea membentuk amoniak. Media urea berisi indikator phenol red.
 
Interpretasi Hasil :
Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi pink/merah jambu, artinya
                  kuman tidak memecah urea membentuk amoniak.
Positif (+) : Tidak terjadi perubahan warna media menjadi pink/merah jambu, artinya
                  kuman memecah urea membentuk amoniak.
 

7. Tes TSIA (Triple Sugar Iron Agar)
Tujuan dari tes ini adalah untuk mengetahui kemampuan kuman untuk memfermentasikan karbohidrat. Pada media TSIA berisi 3 macam karbohidrat yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa. Indikatornya adalah phenol red yang menyebabkan perubahan warna dari merah orange menjadi kuning dalam suasana asam. 

Glukosa berada di dasar media sedangkan laktosa dan sukrosa berada di bagian lereng. Selain menggunakan media TSIA dapat pula digunakan media KIA (Kligers Iron Agar), bedanya adalah pada media KIA hanya berisi 2 macam karbohidrat yaitu glukosa dan laktosa. 

Interpretasi Hasil : 

a. Hanya memfermentasi glukosa : Bila pada dasar (butt) media berwarna kuning (bersifat asam) dan lereng (slant) berwarna merah (bersifat basa) → Al/Ac atau K/A 

b. Memfermentasi semua karbohidrat : Bila pada dasar (butt) media berwarna kuning (bersifat asam) dan lereng (slant) berwarna kuning (bersifat asam) → Ac/Ac atau A/A 

c. Tidak memfermentasi semua karbohidrat : Bila pada dasar (butt) media berwarna merah (bersifat basa) dan lereng (slant) berwarna merah (bersifat basa) → Al/Al atau K/K Fermentasi pada TSIA juga disertai dengan pembentukan gas CO2 yang dapat dilihat dari pecahnya dan terangkatnya agar. 

Media TSIA juga dapat digunakan untuk mengetahui pembentukan H2S yaitu melihat apakah kuman memfermentasi metionin dan sistein (Asam amino yang mempunyai gugus S). Pada media TSIA terdapat asam amino metionin dan sistein, jika kuman memfermentasi kedua asam amino ini maka gugus S akan keluar dan gugus S akan bergabung dengan H2O membentuk H2S. Selanjutnya H2S bergabung dengan Fe2+ membentuk FeS berwarna hitam dan mengendap. 

8. Uji Gula-Gula (Glukosa, Laktosa, Maltosa, Manitol, Sukrosa)

Uji ini digunakan untuk mengetahui apakah kuman memfermentasi masing-masing gula diatas membentuk asam. Media gula-gula ini terpisah dalam 5 tabung yang berbeda dan media yang digunakan adalah masing-masing gula dengan konsentrasi 1% dalam pepton. Masing-masing gula ditandai dengan tinta pada tutup kapas yang berbeda-beda. Untuk glukosa tidak berwarna, laktosa berwarna ungu, maltosa berwarna merah, manitol berwarna hijau, dan sukrosa berwarna biru. Didalam media gula-gula ditambahkan indikator phenol red.

Interpretasi Hasil :

Negatif (-) : Tidak terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Artinya

                  kuman tidak memfermentasi gula 

Positif (+) : Terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Artinya kuman

                 memfermentasi gula membentuk asam

Positif + gas (+g) : Terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Artinya

                           kuman memfermentasi gula membentuk asam dan gas. Gas yang 

                           diperhitungan minimal 10% dari tinggi tabung durham